Notch1基因敲除后鼻咽癌细胞放疗敏感性的变化及分子机制

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的:探讨Notch1基因对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响及其分子机制。方法:使用CRISPR/Cas9技术构建敲除Notch1基因的CNE-2细胞(人鼻咽癌细胞株),通过RT-PCR以及Western blot法检测Notch1基因的表达。经不同剂量射线照射处理后,通过计算各组存活分数(SF),使用Linear-quadratic模型计算拟合剂量生存曲线,计算放射增敏比(SER)。以6 Gy为照射剂量,将实验分为4个组:Notch1(+)组、Notch1(-)组、IR+Notch1(+)组和IR+Notch1(-)组。CCK-8法检测各组细胞增殖情况,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡变化,Western blot检测各组细胞γH2AX、CyclinD1、Bax、Bcl-2和GAPDH蛋白的表达差异。结果:敲除Notch1基因的CNE-2细胞系构建成功。CCK-8实验显示,敲除Notch1可提高鼻咽癌放疗敏感性:与IR+Notch1(+)组细胞相比,IR+Notch1(-)组细胞增殖和细胞存活率显著降低(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI双染法显示,与其他组比较,IR+Notch1(-)组凋亡率最高(P<0.05)。Western blot结果显示,敲除Notch1的鼻咽癌细胞经过照射后,γH2AX的表达量明显升高,Cyclin D1的表达量增高,Bax:Bcl-2比值较高。结论:敲除Notch1信号分子可有效提高体外培养的鼻咽癌细胞的放疗敏感性,其可能是鼻咽癌放疗增敏的一个潜在靶点。

【关键词】 鼻咽癌 敲除 Notch1 放疗敏感性 γH2AX Cyclin D1

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